উচ্চ-মানের রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন পরিশোধন একটি গাইড: ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়া অপ্টিমাইজেশন এবং স্পর্শকাতর প্রবাহ পরিস্রাবণ অ্যাপ্লিকেশন

রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনগুলি বায়োফর্মাসিউটিক্যালস, ভ্যাকসিন বিকাশে এবং ভিট্রো ডায়াগনস্টিকসে . এ তাদের পরিশোধন গুণমানকে সরাসরি ক্রিয়াকলাপ, স্থায়িত্ব এবং সুরক্ষাকে প্রভাবিত করে . ডাউন স্ট্রিমের জন্য উচ্চ-বঞ্চিত, উচ্চ-ফলন প্রোটিনগুলি প্রাপ্ত করার জন্য গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ, উচ্চ-ফলন প্রোটিনগুলি} স্কেলাবিলিটি, প্রোটিন পরিশোধন কর্মপ্রবাহের ক্রমবর্ধমান একটি গুরুত্বপূর্ণ সরঞ্জাম হয়ে উঠছে .

এই নিবন্ধটি টিএফএফ প্রযুক্তির অ্যাপ্লিকেশন কৌশলগুলিতে ফোকাস সহ রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনগুলির ডাউন স্ট্রিম বিশুদ্ধকরণের মূল পদক্ষেপগুলির পদ্ধতিগতভাবে রূপরেখা দেয় . এটি গবেষণা এবং শিল্প ব্যবহারকারীদের শুদ্ধকরণ প্রক্রিয়াগুলি অনুকূল করতে এবং প্রোটিনের গুণমান বাড়িয়ে তুলতে সহায়তা করে.}

 

আমি রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনগুলির ডাউন স্ট্রিম পরিশোধিত মূল পদক্ষেপগুলি .

1. সেল ফসল এবং লিসিস

সেন্ট্রিফিউগেশন/গভীরতার পরিস্রাবণ: কোষের ধ্বংসাবশেষ এবং অমেধ্যগুলি সরিয়ে দেয়; ব্যাকটিরিয়া, খামির ইত্যাদির জন্য উপযুক্ত ., এক্সপ্রেশন সিস্টেম .

সোনিকেশন/উচ্চ-চাপ হোমোজেনাইজেশন: লক্ষ্য প্রোটিন প্রকাশের জন্য কোষগুলি ভেঙে দেয়; শর্তাবলী প্রোটিন অবনতি রোধ করতে অপ্টিমাইজেশন প্রয়োজন .

এনজাইমেটিক লিসিস: ই . জি ., ব্যাকটিরিয়ার জন্য লাইসোজাইম চিকিত্সা; কোমল শর্ত কিন্তু উচ্চ ব্যয় .

2. প্রাথমিক পরিশোধন: টার্গেট প্রোটিনের ক্যাপচার

অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি (ই . জি ., তাঁর ট্যাগ, প্রোটিন এ/জি): উচ্চ নির্দিষ্টতা বাইন্ডিং; একক পদক্ষেপে উচ্চ বিশুদ্ধতা অর্জন করে .

আয়ন এক্সচেঞ্জ ক্রোমাটোগ্রাফি (আইএক্স): চার্জ পার্থক্যের ভিত্তিতে প্রোটিনগুলি পৃথক করে; প্রথম থেকে মধ্য-মধ্যম পর্যায় পরিশোধন জন্য উপযুক্ত .

হাইড্রোফোবিক ইন্টারঅ্যাকশন ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচআইসি): প্রোটিন পৃষ্ঠের হাইড্রোফোবিসিটিতে পার্থক্য ব্যবহার করে; প্রোটিনগুলি নির্দিষ্ট করতে পারে . এর জন্য কার্যকর

3. পলিশিং: বিশুদ্ধতা বাড়ানো

আকার-এক্সক্লিউশন ক্রোমাটোগ্রাফি (এসইসি): সমষ্টি এবং ছোট অণু অমেধ্যগুলি সরিয়ে দেয়; সীমিত লোডিং ক্ষমতা .

মাল্টিমোডাল ক্রোমাটোগ্রাফি (E . g ., ক্যাপ্টো মেনে চলেন): উচ্চতর রেজোলিউশনের জন্য একাধিক ইন্টারঅ্যাকশন মোড একত্রিত করে .

4. ঘনত্ব এবং বাফার এক্সচেঞ্জ

আল্ট্রাফিল্ট্রেশন সেন্ট্রিফুগাল ডিভাইস: ছোট আকারের নমুনাগুলির জন্য উপযুক্ত; প্রোটিন ক্ষতির প্রবণ .

স্পর্শকাতর প্রবাহ পরিস্রাবণ (টিএফএফ): দক্ষ, স্কেলযোগ্য, শিল্প উত্পাদনের জন্য আদর্শ (পরে বিশদ) .

5. জীবাণুমুক্তকরণ এবং স্টোরেজ

0 . 22 মিমি পরিস্রাবণ: জীবাণু নিশ্চিত করে অণুজীবগুলি অপসারণ করে।

স্ট্যাবিলাইজারগুলির সংযোজন (E . g ., গ্লিসারল, বিএসএ): প্রোটিনের অবক্ষয় প্রতিরোধ করে .

 

II {{0} Down ডাউনস্ট্রিম পরিশোধিতকরণে স্পর্শকাতর প্রবাহ পরিস্রাবণের (টিএফএফ) কী অ্যাপ্লিকেশনগুলি

স্পর্শকাতর প্রবাহ পরিস্রাবণ (টিএফএফ) স্পর্শকাতর প্রবাহের মাধ্যমে ঝিল্লি ফাউলিং হ্রাস করে, এটি কেন্দ্রীভূত, ডেসাল্টিং এবং বাফার বিনিময় করার জন্য উপযুক্ত করে তোলে বৃহত-ভলিউম নমুনাগুলি . এটি মৃত-শেষ পরিস্রাবণের (ই {3} g g} .}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}

 

1. টিএফএফ প্রযুক্তির সুবিধা

✔ উচ্চ পুনরুদ্ধার: প্রোটিন শোষণ ক্ষতি হ্রাস করে, বিশেষত মূল্যবান নমুনাগুলির জন্য গুরুত্বপূর্ণ .

✔ লিনিয়ার স্কেলাবিলিটি: ল্যাব স্কেল (10 এমএল) থেকে উত্পাদন স্কেল (1000L+) . এ প্রযোজ্য

✔ প্রক্রিয়া নমনীয়তা: একটি একক সিস্টেম ঘনত্ব, ডায়ালাইসিস (বাফার এক্সচেঞ্জ) এবং ডায়াফিল্ট্রেশন . সম্পাদন করতে পারে

 

2. টিএফএফ ক্যাসেট/ঝিল্লি নির্বাচন গাইড

ঝিল্লি উপাদান	বৈশিষ্ট্য	অ্যাপ্লিকেশন পরিস্থিতি
পলিথেরসুলফোন (পিইএস)	কম প্রোটিন বাইন্ডিং, রাসায়নিকভাবে স্থিতিশীল (পিএইচ প্রতিরোধী), উচ্চ ফ্লাক্স	কঠোর বাফার শর্ত
পুনর্জন্মযুক্ত সেলুলোজ (আরসি)	কম প্রোটিন বাইন্ডিং, উচ্চ প্রবাহ, রুটিন প্রোটিন	রুটিন প্রোটিন/অ্যান্টিবডি পরিশোধন

আণবিক ওজন কাট-অফ (এমডাব্লুসিও) নির্বাচনের নির্দেশিকা:

লক্ষ্য প্রোটিনের আণবিক ওজনের 1/3 থেকে 1/5 (E . g ., 30 কেডিএ প্রোটিনের জন্য একটি 10 ​​কেডিএ ঝিল্লি ব্যবহার করুন) .

সমষ্টিগুলি অপসারণ করতে, একটি ছোট ছিদ্র আকার (E . g . চয়ন করুন, 100 কেডিএ প্রোটিনের জন্য একটি 50 কেডিএ ঝিল্লি ব্যবহার করুন) .

 

3. সমালোচনামূলক টিএফএফ অপারেটিং পরামিতিগুলির অপ্টিমাইজেশন

ট্রান্সমেম্ব্রেন চাপ (টিএমপি): সাধারণত 3-15 পিএসআই; অত্যধিক উচ্চ টিএমপি ফাউলিং . প্রচার করে

স্পর্শকাতর প্রবাহের হার: ঘনত্বের মেরুকরণকে হ্রাস করতে অশান্তি বজায় রাখে; সাধারণত 4-8 এল/মিনিট · m² .

ফলন উন্নতির কৌশল:

সম্পূর্ণ এক্সচেঞ্জের জন্য ডায়াফিল্ট্রেশন চলাকালীন 2-5 বাফার ভলিউম ব্যবহার করুন .

অবশিষ্ট প্রোটিন . পুনরুদ্ধার করতে শেষে ব্যাক-ফ্লাশিং সম্পাদন করুন

 

4. সাধারণ কেস স্টাডি: মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (এমএবি) পরিশোধন

স্পষ্ট সেল সংস্কৃতি তরল → প্রোটিন একটি অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি → লো-পিএইচ ভাইরাল নিষ্ক্রিয়তা → টিএফএফ ঘনত্ব + বাফার এক্সচেঞ্জ → পলিশিং (সেকেন্ড/আইএক্স) → জীবাণুমুক্ত পরিস্রাবণ

 

টিএফএফ ভূমিকা:

দ্রুত পাতলা প্রোটিনকে একটি এলুয়েটকে লক্ষ্য ঘনত্বের দিকে ঘনীভূত করে .

পিবিএস বা ফর্মুলেশন বাফার (ই . g ., হিস্টিডাইন বাফার) .

 

III . সাধারণ সমস্যা এবং সমাধান

❌ সমস্যা 1: কম প্রোটিন পুনরুদ্ধার

সম্ভাব্য কারণগুলি: ঝিল্লি শোষণ; অতিরিক্ত ঘনত্বের কারণে বৃষ্টিপাত .

সমাধান: লো-বাইন্ডিং ঝিল্লিতে স্যুইচ করুন; সার্ফ্যাক্ট্যান্ট যুক্ত করুন (E . g ., 0 . 01% টিউন 20 এর মধ্যে)।

❌ সমস্যা 2: দ্রুত প্রবাহ হ্রাস

সম্ভাব্য কারণগুলি: ঝিল্লি ফাউলিং বা ঘনত্বের মেরুকরণ .

সমাধান: স্পর্শকাতর প্রবাহের হারকে অনুকূলিত করুন; নিয়মিত ব্যাক-ফ্লাশিং প্রয়োগ; আরও খোলা ঝিল্লি কাঠামোতে স্যুইচ করুন (E . g ., 10 কেডিএর পরিবর্তে 30 কেডিএ) .

❌ সমস্যা 3: প্রোটিন সমষ্টি

সম্ভাব্য কারণগুলি: অতিরিক্ত শিয়ার শক্তি; অনুপযুক্ত বাফার .

সমাধান: পাম্প গতি হ্রাস; মৃদু বাফারগুলি ব্যবহার করুন (E . g ., সুক্রোজ বা ন্যাকএলযুক্ত) .

 

IV . সংক্ষিপ্তসার

উচ্চমানের রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনগুলি প্রাপ্তি ডাউন স্ট্রিম পরিশোধন প্রক্রিয়াগুলি . স্পর্শকেন্দ্রিক ফ্লো ফিল্টারেশন (টিএফএফ) প্রযুক্তি, এর দক্ষতা এবং স্কেলাবিলিটি সহ, ঘনত্ব এবং বাফার এক্সচেঞ্জের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ সরঞ্জাম হয়ে উঠেছে. উভয়ই রেশনালভাবে মেমব্রেন ক্যাসেটসকে অপারেশন করে এবং ইন্টিগ্রেটিভের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ সরঞ্জাম, অপ্টিমাইজেশন, ক্যাসেটসকে অপ্টিমাইজিং, অপ্টিমাইজিং, অপ্টিমাইজিং এর উপর নির্ভর করে, উল্লেখযোগ্যভাবে বর্ধিত, গবেষণা এবং শিল্প-স্কেল উত্পাদন উভয়ের দাবি পূরণ করুন .