সাহিত্য ভাগ|জটিল পরিশোধনকে বিদায় জানান? একটি উপন্যাস টিএফএফ + সার্ফ্যাক্ট্যান্ট পদ্ধতি দক্ষতা উন্নত করে এবং এএভি ভেক্টর উত্পাদনে ব্যয় হ্রাস করে
জিন থেরাপি দ্রুত বিকাশ করছে, তবুও এর উচ্চ ব্যয় বিস্তৃত রোগীর অ্যাক্সেস প্রতিরোধকারী একটি বড় বাধা হিসাবে রয়ে গেছে। এই ব্যয়ের মূল চালকদের মধ্যে হ'ল অ্যাডেনো - সম্পর্কিত ভাইরাস (এএভি) ভেক্টরগুলির জটিল উত্পাদন প্রক্রিয়া। বায়োটেকনোলজি এবং বায়োইনজিনিয়ারিংয়ে প্রকাশিত একটি সমীক্ষায় সার্ফ্যাক্ট্যান্টগুলির সাথে স্পর্শকাতর ফ্লো ফিল্টারেশন (টিএফএফ) সংমিশ্রণে একটি অভিনব পরিশোধন পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছে, যা এএভি পরিশোধন প্রক্রিয়াটিকে সহজতর করার এবং ব্যয় হ্রাস করার প্রতিশ্রুতি দেয়। আসুন টোকিও বিশ্ববিদ্যালয় থেকে একটি দলের নেতৃত্বে এই গবেষণাটি আবিষ্কার করি।
1। গবেষণা পটভূমি: চ্যালেঞ্জ এবং এএভি পরিশোধন এর বর্তমান অবস্থা
এএভি ভেক্টরগুলি তাদের উচ্চ সুরক্ষা, কম ইমিউনোজেনসিটি, বিভাজনকারী এবং নন - বিভাজনকারী কোষ এবং দীর্ঘ - শব্দ জিনের প্রকাশের জন্য ক্ষমতা উভয়ই সংক্রামিত করার ক্ষমতা জিন থেরাপিতে "তারা" বিতরণ সরঞ্জামে পরিণত হয়েছে। যাইহোক, তাদের উত্পাদন প্রক্রিয়া জটিল, বিশেষত ডাউনস্ট্রিম পরিশোধন পদক্ষেপগুলি, যা সাধারণত একাধিক রাউন্ড সেন্ট্রিফিউগেশন এবং ক্রোমাটোগ্রাফি জড়িত। এই পদ্ধতিগুলি সময় - গ্রাহক, শ্রম - নিবিড়, স্কেল করা কঠিন এবং ব্যয়বহুল।
ল্যাবরেটরি স্কেলে, পরিশোধন প্রায়শই সিসিয়াম ক্লোরাইড বা আইওডিক্সানল ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউজেশনের উপর নির্ভর করে, যা শিল্প উত্পাদনের জন্য স্কেল করা চ্যালেঞ্জিং। অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি ক্রমবর্ধমানভাবে ব্যবহৃত হয়, তবে এর জন্য কম পিএইচ এলিউশন শর্তগুলি ভাইরাল সংক্রামকতার ক্ষতি করতে পারে। অতএব, একটি সাধারণ, দক্ষ, মৃদু এবং স্কেলযোগ্য এএভি পরিশোধন পদ্ধতি বিকাশ করা গুরুত্বপূর্ণ।
স্পর্শকাতর প্রবাহ পরিস্রাবণ (টিএফএফ) একটি আকার - ভিত্তিক বিচ্ছেদ কৌশল যা সাধারণত ঘনত্ব এবং বাফার - এক্সচেঞ্জিং বায়োপ্রডাক্টগুলির জন্য ব্যবহৃত হয়। যাইহোক, প্রচলিত টিএফএফ এএভি শুদ্ধকরণের সময় হোস্ট সেল প্রোটিন (এইচসিপি) এবং ডিএনএর মতো অমেধ্যগুলি অপসারণ করার সীমিত ক্ষমতা রাখে, প্রায়শই প্রোটিনের সমষ্টিগুলি পিছনে ফেলে রাখে।
2। উদ্ভাবনী পদ্ধতির: দক্ষ পরিশোধন জন্য সার্ফ্যাক্ট্যান্টদের সাথে মিলিত টিএফএফ
Traditional তিহ্যবাহী টিএফএফের সীমাবদ্ধতাগুলি কাটিয়ে ওঠার জন্য, গবেষক রিমি মিয়াওকা, ইউজি সুনেকাওয়া এবং টোকিও বিশ্ববিদ্যালয়ের সহকর্মীরা একটি চতুর কৌশল তৈরি করেছেন: টিএফএফ আল্ট্রাফিলেশন আওয়ারের (500 টির মধ্যে মোড়কে মোকাবেলা করার জন্য সারফ্যাক্ট্যান্টসকে ব্যবহার করে এবং তাদেরকে মোড়কে মোড়কে মোড়কে যেতে দেয় (500 আকারে)।
তারা তিন ধরণের সার্ফ্যাক্ট্যান্ট পরীক্ষা করেছে:
- অ - আয়নিক:Octyl গ্লুকোসাইড
- অ্যানিয়োনিক:সোডিয়াম ডিওক্সাইকোলেট
- জুইটারিয়োনিক:চ্যাপস
সমীক্ষায় দেখা গেছে যে একা একটি নন - আয়নিক সার্ফ্যাক্ট্যান্ট ব্যবহার করা অকার্যকর ছিল। উভয়ই অ্যানিয়োনিক সোডিয়াম ডিওক্সাইকলেট এবং জুইটারিয়োনিক চ্যাপগুলি অবশিষ্ট প্রোটিনগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে অপসারণকে বাড়িয়ে তোলে এবং তারা বিভিন্ন প্রোটিনের জনসংখ্যাকে লক্ষ্য করে। শেষ পর্যন্ত, 1% চ্যাপের সাথে 0.5% সোডিয়াম ডিওক্সাইকোলেটের সংমিশ্রণে উল্লেখযোগ্য ফলাফল তৈরি করে, প্রায় সম্পূর্ণ অবশিষ্টাংশ হোস্ট প্রোটিনগুলি দূর করে। এসডিএস - পৃষ্ঠা বিশ্লেষণে কেবল তিনটি ক্লিয়ার এএভি ক্যাপসিড প্রোটিন ব্যান্ড (ভিপি 1/ভিপি 2/ভিপি 3) দেখিয়েছে।
চিত্র 1। সারফ্যাক্ট্যান্ট ছাড়াই টিএফএফ পরিশোধন প্রক্রিয়া;(ক) এসডিএস - পৃষ্ঠা জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস; (খ) সংক্রমণ ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (টিএম)
চিত্র 1। সার্ফ্যাক্ট্যান্টগুলির সাথে টিএফএফ পরিশোধন প্রক্রিয়া;(ক) এসডিএস - পৃষ্ঠা জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস; (খ) সংক্রমণ ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (টিএম)
3। গবেষণার ফলাফল: উচ্চ বিশুদ্ধতা, ক্রিয়াকলাপ এবং সুরক্ষা
- দক্ষ অপরিষ্কার অপসারণ:নতুন পদ্ধতিটি এইচসিপিগুলি 99.98% অপসারণ এবং ডিএনএর 95% অপসারণ অর্জন করেছে, বিশুদ্ধতার সাথে স্নিগ্ধ ক্রোমাটোগ্রাফির সাথে তুলনীয় বা অতিক্রম করে।
- উন্নত ইনফেকটিভিটি:ভিট্রো পরীক্ষায় দেখা গেছে যে এএভি 1 ভেক্টরগুলি এই পদ্ধতিটি সংক্রামিত এইচকে 293 কোষগুলি ব্যবহার করে শুদ্ধ করেছে যা অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি (24.9% বনাম 20.8%) দ্বারা পরিশোধিতদের চেয়ে আরও দক্ষতার সাথে, ভাইরাল বায়োঅ্যাক্টিভিটির আরও ভাল সংরক্ষণের ইঙ্গিত দেয়।
- ভিভো সুরক্ষায় ভাল:মাউস কঙ্কালের পেশীগুলিতে বিশুদ্ধ এএভি 1 ভেক্টরগুলির স্থানীয় ইনজেকশন অনুসরণ করে, ভিভো সুরক্ষায় ভাল প্রদর্শন করে দুই সপ্তাহ পরে কোনও উল্লেখযোগ্য প্রদাহ বা টিস্যু ক্ষতি দেখা যায়নি।
- ব্রড সেরোটাইপ প্রয়োগযোগ্যতা:পদ্ধতিটি এএভি 1, এএভি 5, এএভি 8, এবং এএভি 9-এর সেল সংস্কৃতি সুপারেনট্যান্টস সহ একাধিক সেরোটাইপস - সফলভাবে পরিশোধিত করেছে। তবে, এএভি 2 এর জন্য, যা মূলত উচ্চ অপরিষ্কার লোড সহ সেল লাইসেটে বিদ্যমান, আরও অপ্টিমাইজেশন প্রয়োজন।
4 .. সংক্ষিপ্তসার এবং দৃষ্টিভঙ্গি
এই অধ্যয়নটি একটি সহজ, দ্রুত (1.5 ঘন্টা), দক্ষ এবং স্কেলযোগ্য নতুন এএভি পরিশোধন প্রক্রিয়া বিকাশ করেছে। সোডিয়াম ডিওক্সাইকলেট এবং চ্যাপগুলি একত্রিত করে, এটি টিএফএফ পরিশোধন চলাকালীন অবশিষ্টাংশের প্রোটিন সংহতকরণের চ্যালেঞ্জকে সফলভাবে সম্বোধন করেছে।
পদ্ধতির সুবিধাগুলির মধ্যে রয়েছে:
- কঠোর কম পিএইচ শর্তগুলি এড়ানো, ভাইরাল ক্রিয়াকলাপ আরও ভাল সংরক্ষণ করা
- ক্রোমাটোগ্রাফির পদক্ষেপগুলি হ্রাস করা, কর্মপ্রবাহকে সহজতর করা এবং সময় এবং ব্যয় সাশ্রয় করা
- সহজেই স্কেলযোগ্য, শিল্প বড় - স্কেল উত্পাদনের জন্য উপযুক্ত
- অন্যান্য বায়োম্যাক্রোমোলিকুলস যেমন এক্সোসোমস, অন্যান্য ভাইরাস এবং পুনঃসংযোগ অ্যান্টিবডিগুলি শুদ্ধ করার জন্য একটি নতুন কৌশল সরবরাহ করা
বর্তমান সীমাবদ্ধতার মধ্যে রয়েছে সাবপটিমাল ভাইরাল পুনরুদ্ধার এবং সম্পূর্ণ ভাইরাল কণাগুলি থেকে খালি ক্যাপসিডগুলি পৃথক করতে অক্ষমতা, এর সর্বোত্তম ব্যবহারের পরামর্শ দেওয়া একটি মাল্টি - ধাপ পরিশোধন কর্মপ্রবাহে প্রথম - পদক্ষেপ ক্যাপচার হিসাবে হতে পারে।
উপসংহারে, এই গবেষণাটি ডাউন স্ট্রিম এএভি ভেক্টর উত্পাদনের জন্য একটি আকর্ষণীয় নতুন বিকল্প সরবরাহ করে এবং জিন থেরাপি ওষুধের ব্যয়কে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করার সম্ভাবনা রয়েছে, তাদের বিস্তৃত প্রয়োগের সুবিধার্থে।
