রিকম্বিন্যান্ট এসচেরিচিয়া কোলির উচ্চ ঘনত্বের গাঁজন লাইসেটের স্পষ্টীকরণ প্রক্রিয়ার উপর অধ্যয়ন

 

ক্রোমাটোগ্রাফিতে বস্তুগত তরলের হস্তক্ষেপ কমাতে এবং লক্ষ্য প্রোটিনের পুনরুদ্ধারের উন্নতির জন্য, রিকম্বিন্যান্ট এসচেরিচিয়া কলির দুটি স্ট্রেইনের উচ্চ ঘনত্বের গাঁজন লাইসেটের স্পষ্টীকরণ প্রক্রিয়া অধ্যয়ন করা হয়েছিল। স্ট্রেন BL{{0}HP1036 এবং BL21-palA প্রকাশকারী স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হিমোফিলাস প্যারাসুইসের মূল জিনগুলিকে নির্বাচন করা হয়েছিল। স্পর্শক প্রবাহ প্রক্রিয়া, উচ্চ-গতি কেন্দ্রীকরণ প্রক্রিয়া এবং ঝিল্লি ক্যাসেট স্পষ্টীকরণ প্রক্রিয়াটি অস্বচ্ছলতা এবং ইলেক্ট্রোফোরেসিস সনাক্তকরণ দ্বারা প্রোটিন ফলন মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

 

ফলাফলগুলি দেখায় যে BL21-HP1036, BL21-palA উচ্চ ঘনত্বের গাঁজন লাইসেট যা স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হেমোফিলাস প্যারাসুইসের মূল জিনগুলিকে প্রকাশ করে মেমব্রেন ক্যাসেট পরিস্রাবণ এবং সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা স্পষ্ট করা হয়েছিল, এবং প্রোটিনের ফলন 8% এর বেশি ছিল, যা কার্যকরভাবে ক্রোমাটোগ্রাফিক হস্তক্ষেপ কমাতে পারে এবং পুনরুদ্ধারের হার উন্নত করতে পারে।

 

ভূমিকা

বর্তমানে, স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস (এসএস) এবং হিমোফিলাস প্যারাসুইস (এইচপিএস) হল শূকর খামারে সবচেয়ে সাধারণ ব্যাকটেরিয়াজনিত রোগজীবাণু, যা শূকর শিল্পের জন্য বড় ক্ষতি করে। SS কে মোট 35টি সেরোটাইপ 1-34 এবং 1/2 ভাগে ভাগ করা যায়, এবং HPS কে 1-15 সেরোটাইপগুলিতে ভাগ করা যায়, এবং দুটি প্রায়শই মিশ্রিত হয়, প্রধানত সোয়াইন পলিসেরোসাইটিস, আর্থ্রাইটিস, মেনিনজাইটিস, এন্ডোকার্ডাইটিস সৃষ্টি করে , ব্যাকটেরিয়াল সেপ্টিসেমিয়া এবং ব্রঙ্কাইটিস।

 

স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হেমোফিলাস প্যারাসুইসের বিপুল সংখ্যক সেরোটাইপের কারণে, বিভিন্ন সেরোটাইপের মধ্যে ক্রস-সুরক্ষা দুর্বল, এবং অ্যান্টিবায়োটিকের সাথে চিকিত্সা করার সময় অ্যান্টিবায়োটিক প্রতিরোধের উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পাবে, যা থেরাপিউটিক প্রভাবকে প্রভাবিত করবে।

 

টিকা এসএস এবং এইচপিএস প্রতিরোধের অন্যতম কার্যকর উপায় হয়ে উঠেছে। নিষ্ক্রিয় ভ্যাকসিন, অ্যাটেনুয়েটেড ভ্যাকসিন, লাইভ ভ্যাকসিন, সাবুনিট ভ্যাকসিন এবং জেনেটিক্যালি ইঞ্জিনিয়ারড ভ্যাকসিন রয়েছে, তবে নিষ্ক্রিয় ভ্যাকসিন এবং অ্যাটেনুয়েটেড ভ্যাকসিনগুলি প্রধানত বাজারে রয়েছে এবং তাদের প্রতিরোধ ক্ষমতা ভাল, তবে ক্রস-সুরক্ষা সুস্পষ্ট নয়। সাবুনিট ভ্যাকসিন হল স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইসের বিরুদ্ধে একটি নতুন ধরনের ভ্যাকসিন, যা শক্তিশালী ক্রস-সুরক্ষা এবং কম দামের একটি নতুন ধরনের ভ্যাকসিন। স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হেমোফিলাস প্যারাসুইসের সাবুনিট ভ্যাকসিনের গবেষণা এবং বিকাশ স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হেমোফিলাস প্যারাসুইসের প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণ সমস্যার একটি নিখুঁত সমাধান প্রদান করে যা চীনের শূকর শিল্পকে আঘাত করে।

 

স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হেমোফিলাস প্যারাসুইস সাবুনিট ভ্যাকসিনগুলি রিকম্বিন্যান্ট এসচেরিচিয়া কোলাই দ্বারা উচ্চ ঘনত্বের গাঁজন করা হয়। লাইসেটের স্পষ্টীকরণ লক্ষ্য প্রোটিনের ফলনের উপর দুর্দান্ত প্রভাব ফেলে, তবে কয়েকটি প্রাসঙ্গিক প্রতিবেদন রয়েছে। গাঁজন এবং পরিশোধন প্রক্রিয়ার স্পষ্টীকরণ ধাপ কীভাবে উপলব্ধি করা যায় তা একটি গুরুত্বপূর্ণ কাজ। এই কাগজে, রিকম্বিন্যান্ট E. coli BL21-HP1036, BL21-প্যালএ উচ্চ-ঘনত্বের গাঁজন বস্তু হিসাবে, কীভাবে দক্ষতার সাথে স্পষ্টীকরণ দ্রবণটির টার্বিডিটি কমানো যায়, প্রোটিন ফলন উন্নত করা যায় তা অধ্যয়ন করার জন্য তাত্ত্বিক ভিত্তি এবং প্রযুক্তিগত সহায়তা প্রদান করার জন্য শিল্প নিষ্পেষণ এবং স্পষ্টীকরণ প্রযুক্তি অর্জনের জন্য Streptococcus suis subunit ভ্যাকসিন গাঁজন প্রক্রিয়া।

 

1. উপকরণ এবং পদ্ধতি

1.1 উপকরণ

 

1.1.1 স্ট্রেন

স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হিমোফিলাস প্যারাসুইস স্ট্রেন BL21-HP1036, BL21-pa-lA

 

1.1.2 প্রধান মিডিয়া এবং বিকারক

খামির নির্যাস এবং porpoise; সোডিয়াম ক্লোরাইড; কানামাইসিন, আইপিটিজি; ফরমালডিহাইড থেকে; SDS-PAGE জেল কিট।

 

1.1.3 প্রধান পরীক্ষার সরঞ্জাম

উচ্চ ঘনত্ব fermenter; উচ্চ গতির সেন্ট্রিফিউজ; ইলেক্ট্রোফোরেসিস যন্ত্রপাতি; আল্ট্রাভায়োলেট জেল ইমেজিং সিস্টেম; অতিস্বনক পেষণকারী; ছোট উচ্চ গতির সেন্ট্রিফিউজ; আল্ট্রাভায়োলেট স্পেকট্রোফটোমিটার; ধ্রুবক তাপমাত্রা কম্পন টেবিল; অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি সরঞ্জাম।

 

1.2 পদ্ধতি

 

1.2.1 উচ্চ-ঘনত্বের গাঁজন সংস্কৃতি

যোগ্য রিকম্বিন্যান্ট কলিফর্ম স্ট্রেন BL21-HP1036 এবং BL21-pa-lA 2%(V/V) এ সিন্থেটিক মিডিয়ামে টিকা দেওয়া হয়েছিল এবং 35-40 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রিতে সংষ্কৃত করা হয়েছিল।

 

1.2.2 রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন ইনডিউসড এক্সপ্রেশন

যখন গাঁজন দ্রবণ OD{{0}}±0.1, আবেশ শুরু হয়, আবেশন তাপমাত্রা ছিল 35 ডিগ্রি ±0.5 ডিগ্রি, এবং আবেশনের 10 ঘন্টা পরে সংস্কৃতি শেষ হয়।

 

1.2.3 উচ্চ-চাপ সমজাতীয় ক্রাশিং এবং সেন্ট্রিফিউগেশন

নিষ্ক্রিয়করণ পরীক্ষায় উত্তীর্ণ ব্যাকটেরিয়া তরলটি যথাক্রমে 100~150 MPa চাপ সহ কোষ ক্র্যাকিংয়ের জন্য উচ্চ চাপের সমজাতীয় যন্ত্র দ্বারা চূর্ণ করা হয়েছিল। চূর্ণ করার পরে, চূর্ণ করা তরলটি কম তাপমাত্রায় রাখা হয়েছিল।

উচ্চ গতির সেন্ট্রিফিউজ দ্বারা সুপারনাট্যান্ট প্রাপ্ত হয়েছিল, সেন্ট্রিফিউগাল গতি: 15000 rpm, তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণ: 10 ডিগ্রি ~15 ডিগ্রি, ইনজেকশন গতি : 0.5~1 L/min, যথাক্রমে, সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং সুপারনাট্যান্টটি পাত্রে ভরা ছিল যা এন্ডোটক্সিনকে সরিয়ে দেয়।

 

1.2.4 মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট স্পষ্টীকরণ

ঝিল্লিটি এক দিকে 10লিটার বিশুদ্ধ জল দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং স্পর্শক প্রবাহ পরিস্রাবণ করা হয়েছিল৷ সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে 300 মিলি ভাঙ্গা ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন পাইপলাইন সেন্ট্রিফিউজ থেকে নেওয়া হয়েছিল এবং 0.45um মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট দিয়ে পরিষ্কার করা হয়েছিল। যথাক্রমে নমুনা দ্বারা টার্বিডিটি পরিমাপ করা হয়েছিল, এবং সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে টার্বিডিটি, মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটে স্পষ্ট তরলটির টার্বিডিটি এবং মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটে ঘনীভূত তরলের টার্বিডিটি তুলনা করা হয়েছিল। প্রোটিন ফলন মূল্যায়ন করার জন্য নমুনার প্রোটিন সামগ্রী ক্রোমাটোগ্রাফি এবং ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল।

 

ধাপ 2: ফলাফল

2.1 স্পষ্টীকরণ ডেটা এবং BL21-HP1036 এবং BL21-palA প্রোটিনের পরীক্ষার ফলাফল

FIG ফলাফল. 1 দেখায় যে BL21-HP1036 এবং BL21-palA রিকম্বিন্যান্ট Escherichia coli ক্রাশিং ফ্লুইডের টার্বিডিটি যথাক্রমে 4 500 NTU এবং 4 000 NTU থেকে 1970 NTU এবং 520 NTU-তে হ্রাস পেয়েছে, টিউব সেন্ট্রিফিউগেশন পরে. মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট পদ্ধতির মাধ্যমে BL21-HP1036 এবং BL21-palA রিকম্বিন্যান্ট এসচেরিচিয়া কোলির টার্বিডিটি 25 NTU এবং 1.28 NTU-তে হ্রাস করা হয়েছিল। এটি দেখা যায় যে মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট ট্যানজেনশিয়াল ফ্লো পরিস্রাবণ এবং অপ্টিমাইজড ওপেন ফ্লো চ্যানেলের ব্যবহার ঐতিহ্যগত সেন্ট্রিফিউজ পরিস্রাবণের তুলনায় ক্রোমাটোগ্রাফিক তরলটির এন্ডোটক্সিন, সান্দ্রতা এবং টার্বিডিটি কমাতে একটি ভাল প্রভাব ফেলে এবং ভাঙ্গা রিকম্বিনেন্ট কোম্পানিটর ইওকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে পারে। এবং নিউক্লিক অ্যাসিড।

 

2.2 BL21-HP1036 এবং BL21-palA নমুনার প্রোটিন পুনরুদ্ধার

সারণী 1 দেখায় যে রিকম্বিন্যান্ট Escherichia coli BL21-HP1036 প্রোটিন মাইক্রোফিল্ট্রেশন ক্ল্যারিফাইড দ্রবণ এবং মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন দ্বারা আবৃত ঘনীভূত সুপারনাট্যান্ট উভয়েই বিদ্যমান এবং মাইক্রোফিল্ট্রেশন ক্ল্যারিফাইড দ্রবণ থেকে প্রোটিন পুনরুদ্ধার করার পর মোট প্রোটিন ফলন এবং ঘনীভূত সুপারনাট্যান্ট। প্রায় 88.5%। BL21-palA প্রোটিন মাইক্রোফিল্ট্রেশন এক্সুডেট ক্ল্যারিফাইড দ্রবণ এবং মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট দ্বারা আবৃত ঘনীভূত দ্রবণের সুপারনাট্যান্টেও বিদ্যমান ছিল। BL21-PALa প্রোটিনের মোট ফলন ছিল ৮১.৫%।

 

3. উপসংহার

এই কাগজে, স্ট্রেপ্টোকক্কাস সুইস এবং হিমোফিলাস প্যারাসুইসের মূল জিন BL{{0}}HP1036 এবং BL21-পালএ প্রকাশ করে যথাক্রমে উচ্চ ঘনত্বের গাঁজন এবং 0.45 পেরিয়ে গেছে উপাদান তরলটির টার্বিডিটি উম মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট প্রক্রিয়া দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, ইঙ্গিত করে যে মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটের সাথে স্পর্শক প্রবাহ পরিস্রাবণ প্রযুক্তি উচ্চ-গতির সেন্ট্রিফিউজের চেয়ে ভাল ছিল এবং ভাঙা রিকম্বিন্যান্ট এসচেরিচিয়া কোলির অপরিষ্কার প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিড উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে পারে।

 

একক মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটে পরিষ্কার তরল সংগ্রহ করার পর, বিএল21-এইচপি1036 এর লক্ষ্য প্রোটিনের 37.1% হিসাবে 62.9% ছিল মাইক্রোফিল্ট্রেশন ঘনীভূত বা মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটে বিদ্যমান ছিল এবং অন্যান্য ক্ষতি , স্পষ্টীকরণের জন্য একটি দ্বি-পদক্ষেপ পদ্ধতি গৃহীত হয়েছিল। প্রথম ধাপে, 0.45um মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেটটি এক্সিউডেট পরিষ্কার করতে এবং সংগ্রহ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল; দ্বিতীয় ধাপে, টিউব সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে অবশিষ্ট ঘনীভূত তরল সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং দুই ধাপের স্পষ্ট তরলকে ক্রোমাটোগ্রাফিক নমুনা হিসাবে একত্রিত করা হয়েছিল। 85.5% এর বেশি, এবং BL21-পালা গাঁজন তরলের প্রোটিন ফলন দ্বি-পদক্ষেপের চিকিত্সার পরে 81.5% এ পৌঁছাতে পারে।

 

কীভাবে মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট বেছে নেবেন, গাইডিং প্রযুক্তি আপনাকে উচ্চ-মানের সমাধান সরবরাহ করতে পারে। আমাদের মাইক্রোফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট এবং আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেন ক্যাসেট সিরিজের পণ্য পলিথার সালফোনকে ক্যারিয়ার হিসেবে ব্যবহার করে, বিশেষভাবে বায়োটেকনোলজির জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। আমাদের পলিথার সালফোন ঝিল্লির উচ্চ থ্রুপুট, কম প্রোটিন শোষণ, উচ্চ যান্ত্রিক শক্তি, প্রভাব প্রতিরোধের সুবিধা রয়েছে। আমরা আপনাকে রিয়েল টাইমে ইনলেট এবং আউটলেটের চাপ পরিমাপ করার জন্য বিশেষ মেমব্রেন ক্ল্যাম্প সরবরাহ করি এবং আপনার বিশেষ আল্ট্রাফিল্ট্রেশন/মাইক্রোফিল্ট্রেশন সিস্টেমকে কাস্টমাইজ করার জন্য আপনার প্রয়োজন অনুযায়ী প্রযুক্তিগত পরিদর্শন প্রদান করতে পারি। এই ধরনের একটি ছোট স্পর্শক প্রবাহ সিস্টেম ছোট, পাইলট এবং ছোট আকারের উত্পাদনের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে এবং আপনার পরীক্ষার প্রয়োজনীয়তা এবং উত্পাদন প্রয়োজনীয়তাগুলি সম্পূর্ণরূপে মেটাতে সম্পূর্ণরূপে রৈখিক পরিবর্ধন হতে পারে।

গাইডলিং সম্পর্কে

গাইডলিং টেকনোলজি হল একটি জাতীয় উচ্চ-প্রযুক্তি সংস্থা যা বায়োফার্মাসিউটিক্যালস, সেল কালচার, বিশুদ্ধকরণ এবং বায়োমেডিসিনের ঘনত্ব, রোগ নির্ণয় এবং শিল্প তরলগুলির উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে। আমরা সফলভাবে সেন্ট্রিফিউগাল ফিল্টার ডিভাইস, আল্ট্রাফিল্টারেশন এবং মাইক্রোফিল্টারেশন ক্যাসেট, ভাইরাস ফিল্টার, TFF সিস্টেম, ডেপথ ফিল্টার, হোলো ফাইবার ইত্যাদি তৈরি করেছি। আমাদের মেমব্রেন এবং মেমব্রেন ফিল্টারগুলি ঘনত্ব, নিষ্কাশন এবং প্রাক-পরিস্রাবণ, মাইক্রোফিল্ট্রেশন, আল্ট্রাফিল্ট্রেশন এবং ন্যানোফিল্ট্রেশনের পৃথকীকরণে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। আমাদের অনেক পণ্য লাইন, ছোট, একক-ব্যবহারের পরীক্ষাগার পরিস্রাবণ থেকে শুরু করে উৎপাদন পরিস্রাবণ সিস্টেম, জীবাণু পরীক্ষা, গাঁজন, কোষ সংস্কৃতি এবং আরও অনেক কিছু, পরীক্ষা এবং উত্পাদনের চাহিদা পূরণ করে। গাইডলিং প্রযুক্তি আপনার সাথে সহযোগিতা করার জন্য উন্মুখ!