আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব ব্যবহারের জন্য সতর্কতা

(1) উপযুক্ত আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব নির্বাচন করুন। সাধারণত, ধরে রাখতে হবে আণবিক ওজন লক্ষ্য প্রোটিনের আণবিক ওজনের 1/3 এর বেশি হওয়া উচিত নয়। উদাহরণস্বরূপ, লক্ষ্য প্রোটিনের আণবিক ওজন 35kDa হলে, 10kDa আণবিক ওজন সহ আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব নির্বাচন করা যেতে পারে। লক্ষ্য প্রোটিনের আণবিক ওজন প্রায় 10kd হলে, 3KD আণবিক ওজন সহ একটি আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব ব্যবহার করা যেতে পারে। নির্দেশিকা ম্যানুয়ালটি সাবধানে পড়ুন এবং বিভিন্ন রাসায়নিকের আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনের বিভিন্ন সহনশীলতার দিকে মনোযোগ দিন।

(2) নতুন কেনা আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুকনো। ব্যবহারের আগে অতি বিশুদ্ধ জল যোগ করুন, এবং জল সম্পূর্ণরূপে ঝিল্লি মাধ্যমে পাস হবে। এটিকে বরফের স্নান বা রেফ্রিজারেটরে কয়েক মিনিটের জন্য ঠান্ডা করুন। তারপর জল ঢালা এবং প্রোটিন সমাধান যোগ করুন। যোগ করা পরিমাণ টিউবের উপরে সাদা লাইনের বেশি হবে না। অপারেশন হালকা হতে হবে। প্রোটিন দ্রবণ যোগ করার আগে, আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবটি প্রিকুলিংয়ের জন্য বরফের উপর ঢোকানো দরকার।

(3) ভারসাম্য। ভর এবং মাধ্যাকর্ষণ কেন্দ্র উভয়ই ভারসাম্যপূর্ণ হওয়া উচিত। লক্ষ্য করুন যে গতি এবং ত্বরণ খুব দ্রুত হওয়া উচিত নয়, অন্যথায় আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেন সরাসরি ক্ষতিগ্রস্ত হবে। সেন্ট্রিফিউগাল আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু করুন (4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ প্রিকুলিং)। বিভিন্ন সেন্ট্রিফিউজের RPM G-তে রূপান্তরিত হওয়ার পর তা ভিন্ন। ঝিল্লির উপর চাপ কমাতে সেন্ট্রিফিউজের ত্বরণকে সর্বনিম্ন গিয়ারে সামঞ্জস্য করুন। মনে রাখবেন যে সেন্ট্রিফিউজ ছেড়ে যাওয়ার আগে সেন্ট্রিফিউজটি লক্ষ্যের গতিতে পৌঁছানো পর্যন্ত আপনাকে অবশ্যই অপেক্ষা করতে হবে, অন্যথায় যখন সেন্ট্রিফিউজে সমস্যা হয়, আপনি প্রথমবার এটি মোকাবেলা করতে পারবেন না। ঝিল্লির দিক এবং ঘূর্ণায়মান শ্যাফ্ট নির্দেশাবলী অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা উচিত (কোণ ঘূর্ণায়মান সেন্ট্রিফিউজের ক্ষেত্রে, ঝিল্লিটি শ্যাফ্টের সাথে লম্ব হয়)। ব্যবহারিক ব্যবহারে, গতি সাধারণত ম্যানুয়ালের তুলনায় কম, যা সেন্ট্রিফিউগাল পাইপের পরিষেবা জীবনকে দীর্ঘায়িত করতে পারে।

(4) যখন এটি অবশিষ্ট 1ml-এ ঘনীভূত হয়, তখন 50ul বাফার দ্রবণ নিন এবং এটি নীল হয়ে যায় কিনা তা দেখতে 10ul দিয়ে প্রবাহিত করুন, যাতে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব প্রোটিন ফুটো করে কিনা তা বিচার করতে। টিউব ফুটো হলে, উপরের স্তরটি ঢেলে দিন এবং নতুন টিউবের মধ্য দিয়ে প্রবাহিত করুন এবং আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু করুন। টিউবটি ফুটো হচ্ছে কিনা তা সঠিকভাবে বিচার করতে, 5mgml BSA দিয়ে 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন, তারপরে প্রবাহ নিন, মোটামুটি পরিমাপের জন্য প্রোটিন আঠা বা ব্র্যাডফোর্ড চালান এবং ঘনত্বের জন্য অবশিষ্ট প্রোটিন দ্রবণ যোগ করা চালিয়ে যান (প্রোটিনটি প্রতিরোধ করতে বরফের উপর কাজ করুন) উত্তপ্ত) যতক্ষণ না সমস্ত ঘনীভূত সমাধান যোগ করা হয়। সেন্ট্রিফিউগেশনের সময় প্রোটিন বৃষ্টিপাত ঘটে কিনা সেদিকে মনোযোগ দিন, যার ফলে পাইপ ব্লকেজ হয়। যদি বৃষ্টিপাত ঘটে, তাহলে বৃষ্টিপাতের নির্দিষ্ট কারণ নির্ধারণ করুন, প্রোটিনের ঘনত্ব খুব বেশি বা বাফারটি অনুপযুক্ত কিনা; প্রাক্তনটি ঘনত্ব কমাতে একাধিক আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবের সাথে একযোগে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন দ্বারা সমাধান করা যেতে পারে। পরেরটি হল প্রোটিন ক্ষয় না হওয়া পর্যন্ত বিভিন্ন বাফার সমাধান পরিবর্তন করা।

(5) পূর্ববর্তী ধাপগুলি প্রোটিনকে ঘনীভূত করতে ব্যবহৃত হয়। আপনি যদি বাফার পরিবর্তন করতে চান, যখন মোট প্রোটিন দ্রবণটি প্রায় 1ml ঘনীভূত হয়, তখন আলতো করে একটি নতুন বাফার যোগ করুন (0.22um আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনের মাধ্যমে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন), এবং তারপর পরপর তিনবার প্রায় 1ml-এ ঘনীভূত করুন। শেষ ঘনত্বের চূড়ান্ত ভলিউম প্রয়োজনীয় প্রোটিন ঘনত্বের উপর নির্ভর করে, যা সাধারণত 500ul-এর বেশি নয়, অথবা এটি 200ul-এর কম ঘনত্ব হতে পারে। প্রতিবার কমপক্ষে 10 বার ভলিউম ঘনত্ব অনুসারে, এটি তিনবার 1000 গুণের বেশি পৌঁছতে পারে, যা মূলত বাফার পরিবর্তনের উদ্দেশ্য অর্জন করতে পারে।